雙色SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(5×,含DTT)是一種用于SDS-PAGE電泳的蛋白上樣緩沖液,具有獨特的雙色設計和含有DTT的特性。以下是對該緩沖液的詳細解析:
一、產(chǎn)品特性
雙色設計:雙色SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液在傳統(tǒng)蛋白上樣緩沖液的基礎上加入了紅色染料,形成了藍色和紅色兩種顏色的混合物。這種設計使得在電泳過程中可以清晰地觀察到蛋白質(zhì)的遷移情況,同時紅色染料還可以隨蛋白質(zhì)一起轉移到轉印膜上,用于監(jiān)視轉膜效率。
含有DTT:DTT(二硫蘇糖醇)是一種強還原劑,能夠斷裂蛋白質(zhì)中的二硫鍵,使蛋白質(zhì)結構變得松散,從而消除蛋白質(zhì)結構之間的差異。這有助于在電泳過程中獲得更清晰的蛋白質(zhì)條帶。
5×濃度:該緩沖液為5倍濃縮液,使用時需要按照一定比例稀釋。這種設計便于儲存和運輸,同時在使用時可以靈活調(diào)整緩沖液的體積。
二、使用方法
溶解與混勻:將雙色SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液從冰箱中取出,室溫或水浴溶解后輕輕搖勻,確保溶液混合均勻。
樣品處理:將適量的蛋白質(zhì)樣品與緩沖液混合,通常按照一定比例進行(如每4μL蛋白質(zhì)樣品中加入1μL的5×緩沖液)。混合后,進行加熱變性處理(如95~100℃水浴加熱10分鐘),使蛋白質(zhì)充分變性。
上樣與電泳:冷卻至室溫后,離心去除可能的沉淀物,取上清液進行上樣。電泳過程中,注意控制電壓和時間,觀察藍色和紅色染料的遷移情況。當藍色染料到達凝膠底部附近時,可以停止電泳。
轉膜與監(jiān)視:如果需要進行蛋白質(zhì)轉膜操作,可以利用紅色染料隨蛋白質(zhì)一起轉移到轉印膜上的特性,監(jiān)視轉膜效率。
三、注意事項
儲存條件:雙色SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液應存放在-20℃冰箱中保存,避免反復凍融。在儲存過程中,可能會出現(xiàn)SDS沉淀現(xiàn)象,使用前應在溫水中溶解。
安全性:由于該緩沖液中含有DTT等化學成分,具有一定的毒性。在使用過程中應穿戴適當?shù)姆雷o裝備(如實驗服、手套等),避免直接接觸和吸入。
適用性:該緩沖液適用于常規(guī)的SDS-PAGE電泳和蛋白質(zhì)轉膜操作。但請注意,由于含有DTT等還原劑成分,可能不適用于某些特定的實驗條件或蛋白質(zhì)樣品。
四、產(chǎn)品優(yōu)勢
清晰的電泳條帶:由于含有DTT成分,能夠斷裂蛋白質(zhì)中的二硫鍵,使蛋白質(zhì)結構變得松散,從而在電泳過程中獲得更清晰的蛋白質(zhì)條帶。
便于觀察與監(jiān)視:雙色設計使得在電泳過程中可以清晰地觀察到蛋白質(zhì)的遷移情況;同時紅色染料還可以隨蛋白質(zhì)一起轉移到轉印膜上,用于監(jiān)視轉膜效率。
靈活的使用方式:5×濃度的設計便于儲存和運輸;同時在使用時可以靈活調(diào)整緩沖液的體積以滿足不同實驗需求。
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