產(chǎn)品時(shí)間：2023-02-01
醋酸-醋酸鈉緩沖液(0.01mol,pH8.0)：在緩沖溶液中加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，其溶液pH值變化不大，但若加入酸，堿的量多時(shí)，緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。這說(shuō)明它的緩沖能力是有一定限度的。
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| 醋酸-醋酸鈉緩沖液優(yōu)惠供應(yīng) 規(guī)格：500ml 保存：4℃, 有效期：12個(gè)月 說(shuō)明：醋酸、醋酸鈉，濃度為0.4M。 | |||||||
PCR的引物設(shè)計(jì)原則 一般原則: 1、引物的長(zhǎng)度一般為15-30 bp,常用的是18-24 bp,但不應(yīng)大于38。引物過(guò)短又同時(shí)會(huì)引起錯(cuò)配現(xiàn)象,一般來(lái)說(shuō)引物長(zhǎng)度大于16bp是必要的(不容易引起錯(cuò)配)。 2、引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒(méi)有相似性較高,尤其是3’端相似性較高的序列,否則容易導(dǎo)致錯(cuò)配。引物3’端出現(xiàn)3 個(gè)以上的連續(xù)堿基,如GGG 或CCC,也會(huì)使錯(cuò)誤引發(fā)機(jī)率增加。 3、引物3’端的末位堿基對(duì)Taq 酶的DNA 合成效率有較大的影響。不同的末位堿基在錯(cuò)配位置導(dǎo)致不同的擴(kuò)增效率,末位堿基為A 的錯(cuò)配效率明顯高于其他3 個(gè)堿基,因此應(yīng)當(dāng)避免在引物的3’端使用堿基A。另外,引物二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)也可能導(dǎo)致PCR 反應(yīng)失敗。 5’端序列對(duì)PCR 影響不太大,因此常用來(lái)引進(jìn)修飾位點(diǎn)或標(biāo)記物。 4.、引物序列的GC 含量一般為40-60%,過(guò)高或過(guò)低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物的GC 含量不能相差太大。不同的算法推薦45-55%或50-60% 5、?G 值是指DNA 雙鏈形成所需的自由能,該值反映了雙鏈結(jié)構(gòu)內(nèi)部堿基對(duì)的相對(duì)穩(wěn)定性。應(yīng)當(dāng)選用3’端?G 值較低(絕對(duì)值不超過(guò)9),而5’端和中間?G 值相對(duì)較高的引物。引物的3’端的?G 值過(guò)高,容易在錯(cuò)配位點(diǎn)形成雙鏈結(jié)構(gòu)并引發(fā)DNA 聚合反應(yīng)。(能值越高越容易結(jié)合) 6.、對(duì)引物的修飾一般是在5’端增加酶切位點(diǎn),應(yīng)根據(jù)下一步實(shí)驗(yàn)中要插入PCR 產(chǎn)物的載體的相應(yīng)序列而確定 7.、引物二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)PCR反應(yīng)的影響。盡可能少的引物二聚體。 3、如何使用GenBank獲取數(shù)據(jù): | |||||||
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